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實時熒光PCR試劑盒常見問題:
一.沒有擴增產物
.循環溫度:變性溫度、退火溫度
2.引物設計
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA樣品
二.非特異產物及電泳呈涂布狀
.Mg2 濃度
2.調整引物、模板、聚合酶的用量
3.適當減少循環數
4.適當提高退火溫度,縮短退火或延伸時間?
產品名稱 | 實時熒光PCR試劑盒 |
規格 | 48T/盒 |
分類 | 實時熒光PCR試劑盒 |
?
使用及效果:
PCR反應特點
() 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=0-2g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=0-6g)水平。能從00萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。
?乙酰乙異丙酯 542-08-5 00次
delta-戊內酯 542-28-9 00µg Human Genomic DNA 4℃保存
2-氨基己二水合物 542-32-5 00µg Human Genomic DNA 4℃保存
3-氯丙 542-76-7 00µg Human Genomic DNA Mix 4℃保存
4-溴哌啶鹽 54288-70-9 00µg Mouse Genomic DNA 4℃保存
4-氨苯乙乙酯 5438-70-0 30µg Human Culture Cell Genomic DNA 4℃保存
2-基-3-三氟基胺 54396-44-0 50次 TRAP Kit -20℃保存
亞硝丁酯 544-6- 600次 AFLP Kit(EcoRI-MseI) -20℃保存
2,6-二羥基-3-基-4-基啶 5444-02-0 5次 cDNA Library Construction Kit Dr. GenTLE Precipitation Carrier 4℃保存,3 M Sodium Acetate(pH5.2) 4℃保存,Spin Column 4℃保存,FALCON Tube 常溫保存,E.coli Electro-Cells -80℃保存,SOC 4℃保存,其他組份-20℃保存
2-溴己酯 5445-9-2 套 One-Stop PCR-SSCP Pack 除PCR MagicMix 2.0需要-20℃保存外,其余成分可以保存
4-硝苯乙乙酯 5445-26- 00次 RAPD PCR Kit 除PCR MagicMix 2.0需要-20℃保存外,其余成分可以保存
4-甲氧基水楊酯 29588 50次 DOP-PCR Kit -20℃保存
十六烷 544-77-4 0次 SSH-PCR Kit -20℃保存
二基鋅 544-97-8 0次 3'-RACE Kit -20℃保存
-溴-5-氯戊烷 5452-75-3 0次 5'-RACE Kit -20℃保存
去氧膽鹽瓊脂 規格: 0.2ml Rat glucocorticoid receptor-α,GR-α
中國藍乳糖瓊脂 規格: 0.ml Rat glucocorticoid receptor-β,GR-β
膽乳瓊脂 規格: 0.2ml Rat glucocorticoid receptor,GR
慶大素瓊脂 規格: 0.2ml Rat carbohydrate-deficient transferrin,CDT
米勒-海頓瓊脂 規格: 0.2ml Rat glycogen synthase kinase,GSK
米勒-海頓肉湯 規格: 0.2ml Rat Glycogen phosphorylase BB,GP-BB
抗生素Ⅰ號培養基(Ph6.5~6.6) 規格: 0.2ml Rat Glycogen phosphorylase II,GP-II
抗生素Ⅰ號培養基(Ph7.8~8.0) 規格: 0.ml Rat Glycogen phosphorylase MM,GP-MM
抗生素Ⅱ號培養基(Ph6.5~6.6) 規格: 0.2ml Rat ferritin,FE
抗生素Ⅱ號培養基(Ph7.8~8.0) 規格: 0.ml Rat Homocysteic acid,Hcy
抗生素Ⅲ號培養基 規格: 0.ml Rat Hyaluronic acid,HA
抗生素Ⅳ號培養基 規格: 0.ml Rat Hya]uronate binding protein,HABP
抗生素Ⅴ號培養基 規格: 0.2ml Rat Melatonin,MT/MLT
抗生素Ⅵ號培養基 規格: 0.ml Rat Dehydroepiandrosterone,DHEA
抗生Ⅶ號培養基 規格: 0.ml Rat Dehydroepiandrosterone S7,DHEA-S7
特點:
. 實時熒光PCR試劑盒即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準確快速。
2. 引物經過優化,特異性強。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結果。
用途:
. 方便,用戶只需準備模板和引物既可以進行PCR 實驗。
2. 快捷,操作步驟已經限度地簡化,能減少污染,降低實驗誤差。
3. 本產品A 型含電泳染料,PCR 反應液可直接上樣電泳,進一步簡化了操作。
4. 由于各成分的濃度和比例都經過精心優化,反應的靈敏度高,特異性強。能擴增各種常見的DNA 樣品。
5. 產物可直接用于T 載體克隆,不需要額外的加A 反應。
使用及效果:將本產品5 μL 與用戶自備的模板,引物和水共5 μL 混合后,直接進行PCR反(PCR 參數由用戶自己確定),反應結束后直接取0 μL 電泳檢查擴增結果。
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